Иммуноблоттинг (син. вестернблоттинг) - высокочувствительный метод выявления белков, основанный на сочетании электрофореза и ИФА или РИА.
Антигены возбудителя разделяют с помощью электрофореза в полиакриламидном геле, затем переносят их (блоттинг - от англ, blot, пятно) из геля на активированную бумагу (1) или нитроцеллюлозную мембрану и проявляют с помощью ИФА. Фирмы выпускают такие полоски с "блотами" антигенов. На эти полоски наносят сыворотку больного (2). Затем, после инкубации, отмывают от несвязавшихся антител больного и наносят сыворотку против иммуноглобулинов человека, меченную ферментом (3). Образовавшийся на полоске комплекс [антиген + антитело больного + антитело против Ig человека] выявляют добавлением хромогенного субстрата (4), изменяющего окраску под действием фермента.
Таким образом, выявляются непосредственно белки вируса, который не только давно выделен и сфотографирован, а ещё и является одним из наиболее изученных.
Что такое Иммуноблоттинг
Сообщений 1 страница 2 из 2
Поделиться12010-02-10 20:13:59
- Администратор
- Зарегистрирован: 2010-02-08
- Приглашений: 0
- Сообщений: 76
- Уважение: +3
- Позитив: +6
- Провел на форуме:
19 часов 38 минут - Последний визит:
2011-01-15 16:48:24
Поделиться22010-02-15 22:47:48
Иммунный блотинг действует по похожей схеме как ИФА, но для него используется электрическое поле, которое различает различные компоненты на основе их молекулярной массы. Это позволяет определить антитела к специфическим вирусным антигенам, которые затем изображаются на бумаге как различимые "полоски". Иммунный блотинг, по словам Лиски: "Несколько сложнее для проведения… и гораздо более трудоемок". Иммунный блотинг также менее чувствителен, добавляет она, поэтому он "никогда не должен применятся сам по себе".
Иммунный блотинг - самый распространенный подтверждающий тест, но были разработаны и другие тесты для этой цели, например анализ на непрямые флуоресцирующие антитела, или радиоиммунный анализ. "При условии правильного проведения и интерпретации, эти очень специфические тесты не дают ложноположительных результатов"